Diabetologia：转录但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现家兔自身特异性到再次出现1型号哮喘药理学症状的成果赴援在成人一时期就有不错的描述，多个家兔自身特异性HIV的成人中会有70%在血清转换后10周内患上哮喘，而随访15年的成人这一%降低到84%。比起之下，占到药理学1型号哮喘一半以上的型号1型号哮喘的患病机制还不能取得充分的研究者。

越来越多的人开始常用分期系统来界定1型号哮喘的成果：生殖在再次出现多种家兔自身特异性时踏入第1阶段，再次出现食欲异常时踏入第2阶段，再次出现症状时踏入第3阶段。一些多发家兔自身特异性HIV的生殖，在1期和2期，成果较慢，并发展为患病的1型号哮喘。我们先前描述了一两组在首次检查到多种家兔自身特异性结果显示后至不算10年无哮喘的极慢成果者，这两组病症人数不算，但整体特征非常明确。随后，我们见到家兔自身复合物特异性CD8+T细胞会反应在成果减慢的病症中会整体不存在，但在近期患病和长期存在的哮喘病症中会很容易检查到。这可能证明，与成果病症比起，这些病症自身免疫反应的闭环大幅提高。

早期研究者证明，尽管闭环性T细胞会(Treg)数量正常，但哮喘病症存在一些功能毛病，其中会包括对IL-2的反应能力降低。此外，哮喘病症中会的效应CD4+T细胞会可能对闭环格外为重要抵抗性，发挥为效应T细胞会的可抑制减弱，其本质产生的Treg和体外产生的抑制Treg，以及复合物年中的CD4+T细胞会中会IL-2反应减弱。本研究者的目的是描述了CD4+闭环性T细胞会(Treg)在一小群极减慢成果者中会的整体特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群为基础的垂直研究者，在21岁下述肺炎的病症亲属中会检查1型号哮喘的危险因素。我们先前描述了长期减慢成果者的整体特征，他们保持多重家兔自身特异性HIV超过10年，但不能再次出现哮喘的药理学症状，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续保持无哮喘并愿意提供大量血液结果显示的减慢成果者纳入T和B细胞会功能数据分析。在目前的研究者中会，8名慢成果者(SP两组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的家兔自身特异性HIV。所有的参与者都保持稳定1型号哮喘成果的1期，尽管一些人随后夺去了家兔自身特异性对某些复合物的HIV反应，然而，一名病症早就保持稳定2期至不算6年，但不能再次出现药理学症状，一名病症被诊疗为哮喘，该成年人72岁，在搜集实验结果显示时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在生物信息学中会对该丝氨酸顺利完成了除此以外评估。转化外周血单个核细胞会(PBMCs)，有别于多参数流式细胞会奥义和T细胞会可抑制检查评估丝氨酸中会Treg的高频赴援、环境因素号和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利完成无监督聚类数据分析，评估Treg环境因素号。

结果：与有益丝氨酸比起，来自慢成果体的潜意识CD4+T细胞会的监督聚类推断，介导的潜意识CD4+ Treg高频赴援降低，与止痛药抑制的TNFR方面蛋白质(GITR)表达出来降低有关。一名HbA1c消退的病症与成果减慢者和匹配的相符合两组比起，Treg谱并不相同。功能数据分析证明，与有益丝氨酸比起，来自减慢成果体的Treg介导的CD4+效应T细胞会可抑制微小受损。发挥为对效应CD4+T细胞会CD25和CD134表达出来的可抑制降低。

上图1 集中会的环境因素号数据分析推断，CD4+Treg亚型号在慢成果配置文件中会降低。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标示出物表达出来鉴定出10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)常用9个各不相同Treg标示出分解成的10个元簇的MST。每个结点代表一个协同(100个协同)，巨大的元协同(10个元协同)在结点两组周遭上色。每个结点中会的饼上图透露单个标示出的表达出来级别。(b)每个元聚类的热上图，以推断整体标示出表达出来。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)分解成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较总质量为每个metacluster箱该线上图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP两组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。橙色白点代表捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 常用CITRUS的预测模型号证实，Treg高频赴援的降低是成果减慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)相比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来顺利完成转化，模拟器FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(白点)两组以及丝氨酸SP 606(橙色)中会CD25+ cd127的高频赴援概要上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控可数的箱该线上图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑橘簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD配置文件二者之间的各不相同。(j)箱该线上图推断了在SP(白点)和HD(灰点)两组中会，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相较总质量(%)。(k)概赴援分布推断每个簇的环境因素号(暗红色)和Treg标示出相较表达出来与取材表达出来(黄色);上列，内核Treg_3;请注意即刻，内核Treg_4。取材与所有其他簇中会标示出的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查

上图3 与有益献血者比起，成果减慢者潜意识treg的GITR降低。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个表达出来标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表达出来热上图(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中会所有HD(白色)、所有SP(黄色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR表达出来串联，推断概赴援分布(c)和概要上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查，p< 0.07(橙色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(黄色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表达出来，从分级门控，从所有HD(白色)、所有SP(黄色)和SP 606(橙色)串联，推断概赴援分布(e)和概要上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查

上图4 来自减慢成果的CD4+ treg细胞会控制效应CD4+T细胞会的能力降低。SP两组用黄色的该线和白点透露，HD两组用黑色的该线和白点透露，橙色的该线/白点透露丝氨酸sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利完成分选。CD4+CD25−(应答者)被标示出为CFSE, Treg按判读的%滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，人才3翌日顺利完成流式细胞会奥义检查。(a-d)与CD4+应答者相较应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制总和。常用HIV相符合(介导的响应细胞会不含treg)计算可抑制总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

上图5 效应CD4+T细胞会对减慢成果的T细胞会还原的可抑制格外敏感。SP两组用黄色的该线和白点透露，HD两组用黑色的该线和白点透露，橙色的该线/白点透露丝氨酸sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利完成分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标示出，treg按判读的%滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，人才3翌日顺利完成流式细胞会奥义(CD25反染)和细胞会因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制百分赴援(b)。(c,d) CD25可抑制百分赴援(c)和CD134可抑制百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中会的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

结论：我们断定的结论是，来自减慢成果子的还原潜意识CD4+Treg在GITR表达出来中会取得了拓展和丰富，强调了进一步研究者Treg在1型号哮喘风险生殖中会的异质性的全面性。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28