Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中都逐渐扩展

从第一次注意到人体内自身血清到注意到1改型白血病诊疗症状的十分困难率在学童时期就有较好的描述，多个人体内自身血清特征性的学童里面有70%在血清转换后10在短期内患上白血病，而随访15年的学童这一比重减少到84%。比起之下，占总诊疗1改型白血病一半以上的改型1改型白血病的得病机制还未给与充份的研究成果。

越来越多的人开始用于分期系统来定义1改型白血病的十分困难：个体在注意到多种人体内自身血清时进到第1期中，注意到血糖所致时进到第2期中，注意到症状时进到第3期中。一些多发人体内自身血清特征性的个体，在1期和2期，十分困难较慢，并持续发展为得病的1改型白血病。我们先前描述了一分组在首次探测到多种人体内自身血清试样后至多于10年无白血病的很慢十分困难者，这分组患儿人数多于，但特征非常明确。随后，我们断定人体内自身上皮细胞特异性CD8+T细胞内反应在十分困难较快的患儿里面基本不实际上，但在全面性得病和长期实际上的白血病患儿里面很容易探测到。这确实表明，与十分困难患儿比起，这些患儿特异性的调控增强。

早期研究成果表明，尽管调控性T细胞内(Treg)数量正常，但白血病患儿实际上一些功能缺陷，其里面最主要对IL-2的反应战斗能力下降。此外，白血病患儿里面的效应CD4+T细胞内确实对调控非常具抵抗性，表现为效应T细胞内的抑止增强，人为产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞内里面IL-2反应增强。本研究成果的目的是描述了CD4+调控性T细胞内(Treg)在一小群总括较快十分困难者里面的特征，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX研究成果是一项以人群为基础的中轴研究成果，在21岁以下确诊的患儿亲属里面检查1改型白血病的危险因素。我们先前描述了长期较快十分困难者的特征，他们持续保持多重人体内自身血清特征性最少10年，但未注意到白血病的诊疗症状，慢性或非神经性免疫。随后，10名继续持续保持无白血病并愿意共享大量血液试样的较快十分困难者划入T和B细胞内功能深入研究。在迄今的研究成果里面，8名慢十分困难者(SP分组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身血清特征性。所有的参加者都西北面1改型白血病十分困难的1期，尽管一些人随后夺去了人体内自身血清对某些上皮细胞的特征性反应，然而，一名患儿先前西北面2期至多于6年，但未注意到诊疗症状，一名患儿被诊断为白血病，该受试者72岁，在收集实验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在深入研究里面对该小分子来进行了单独评估。分立外周血单个核细胞内(PBMCs)，转用多参数流式细胞内忍术和T细胞内抑止试验评估小分子里面Treg的Hz、遗传和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)来进行无指导聚类深入研究，评估Treg遗传。

结果：与肥胖小分子比起，来自慢十分困难体的潜意识CD4+T细胞内的指导聚类看出，启动时的潜意识CD4+ TregHz减少，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)问到减少有关。一名HbA1c升高的患儿与十分困难较快者和比如说的对照分组比起，Treg谱有所相异。功能深入研究表明，与肥胖小分子比起，来自较快十分困难体的Treg介导的CD4+效应T细胞内抑止明显损坏。表现为对效应CD4+T细胞内CD25和CD134问到的抑止减少。

所示1 侧重的遗传深入研究看出，CD4+Treg亚改型在慢十分困难路由表里面减少。由FlowSOM分解成的Treg四楼，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标识物问到解剖出10个元簇:潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用于9个相异Treg标识分解成的10个元簇的MST。每个节点代表一个集群(100个集群)，非常大的元集群(10个元集群)在节点分组周围成品。每个节点里面的饼所示问到单个标识的问到级别。(b)每个元聚类的热所示，以看出整体标识问到。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)分解成所示，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于总质量为每个metacluster箱该线所示(总质量> 0.05%)确定为HD和SP分组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞内(l)。橙色左上方代表ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用于CITRUS的预测模改型证实，TregHz的减少是十分困难较快的标志。分级制度去总括化(a - f)和水果深入研究(g-k)比较SP参加者和比如说的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR问到来进行分立，精心设计FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及小分子SP 606(橙色)里面CD25+ cd127的Hz统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去总括化开集的箱该线所示;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)油菜簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3问到其中心着色，箭头突出的簇被辨识为SP和HD路由表之间的相异。(j)箱该线所示看出了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对于总质量(比重)。(k)直方所示看出每个簇的遗传(白色)和Treg标识相对于问到与取材问到(浅蓝色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。取材与所有其他簇里面标识的问到有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检验

所示3 与肥胖献血者比起，十分困难较快者潜意识treg的GITR减少。每个潜意识CD4+T细胞内元簇(潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个问到标识的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的问到热所示(sp606不最主要在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR问到串联，看出直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon配对大写字母秩和检验，p< 0.07(橙色)所有小分子最主要，p< 0.05(浅蓝色)小分子SP 606和比如说的HD不最主要在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR问到，从分级制度去总括化，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)串联，看出直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写字母秩检验

所示4 来自较快十分困难的CD4+ treg细胞内管控效应CD4+T细胞内的战斗能力下降。SP分组用浅蓝色的该线和左上方问到，HD分组用金色的该线和左上方问到，橙色的该线/左上方问到小分子sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标识为CFSE, Treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，培养3天后来进行流式细胞内忍术探测。(a-d)与CD4+；也者相对于应的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培养。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。用于特征性对照(启动时的响应细胞内不含treg)计算抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 效应CD4+T细胞内对较快十分困难的T细胞内活化的抑止非常敏感。SP分组用浅蓝色的该线和左上方问到，HD分组用金色的该线和左上方问到，橙色的该线/左上方问到小分子sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标识，treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，培养3天后来进行流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培养。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE抑止三份(b)。(c,d) CD25抑止三份(c)和CD134抑止三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养里面的问到。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们结论的事实是，来自较快十分困难子的活化潜意识CD4+Treg在GITR问到里面给与了扩展和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1改型白血病危险性个体里面的举例来说的必要性。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28