Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病人进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现口内自身特异性到浮现1型式白血病诊断呕吐的方面率在成人时期就有很好的所述，多个口内自身特异性感染性的成人当中有70%在血清转换后10年内患上白血病，而随访15年的成人这一数目减少到84%。相比之下，分之二诊断1型式白血病一半以上的型式1型式白血病的复发机制还很难得到前提的研究成果。

愈来愈多的人开始适用分期系统来定义1型式白血病的方面：个体在浮现多种口内自身特异性时带入第1阶段，浮现血糖异常时带入第2阶段，浮现呕吐时带入第3阶段。一些多发口内自身特异性感染性的个体，在1期和2期，方面较慢速，并发展为复发的1型式白血病。我们早先所述了四两组在首次侦测到多种口内自身特异性样本后至少10年无白血病的较快方面者，这两组高血压人数少，但相同之处非常明确。随后，我们找到口内自身肝细胞特异性CD8+T酶质质兄化在方面较慢速的高血压当中基本不不存在，但在更进一步复发和起因于的白血病高血压当中很容易侦测到。这不太可能说明，与方面高血压相比，这些高血压自身免疫质兄化的闭环减慢速。

早期研究成果说明，尽管闭环性T酶质(Treg)数量短时间，但白血病高血压不存在一些功能缺点，其当中包括对IL-2的质兄化灵活性增高。此外，白血病高血压当中的波动CD4+T酶质不太可能对闭环格外具抵抗性，平庸为波动T酶质的诱发西移动，自然产生的Treg和体外产生的诱发Treg，以及肝细胞经历的CD4+T酶质当中IL-2质兄化西移动。本研究成果的意在是所述了CD4+闭环性T酶质(Treg)在一小群极较慢速方面者当中的相同之处，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX研究成果是一项以人群基础上的中轴研究成果，在21岁请注意确诊的高血压亲属当中检查1型式白血病的危险各种因素。我们早先所述了依然较慢速方面者的相同之处，他们维持多重口内自身特异性感染性超过10年，但很难浮现白血病的诊断呕吐，慢速性或非完成性自身免疫。随后，10名继续维持无白血病并不想提供大量血液样本的较慢速方面者纳入T和B酶质功能分析。在现今的研究成果当中，8名慢速方面者(SP两组)，当中位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身特异性感染性。所有的旁观者都属于1型式白血病方面的1期，尽管一些人随后丧失了口内自身特异性对某些肝细胞的感染性质兄化，然而，一名高血压已经属于2期至少6年，但很难浮现诊断呕吐，一名高血压被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析当中对该供体完成了单独审反应器。分离外周血单个反应器酶质(PBMCs)，采用多参数流式酶质术和T酶质诱发试验审反应器供体当中Treg的振幅、遗传基因式和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类比对、也就是说和重归)完成无监督聚类分析，审反应器Treg遗传基因式。

结果：与肥胖症供体相比，来自慢速方面体的思绪CD4+T酶质的监督聚类表明，触发的思绪CD4+ Treg振幅减少，与糖皮质激素诱发的TNFR相关酶(GITR)理解减少有关。一名HbA1c升高的高血压与方面较慢速者和冗余的解读两组相比，Treg磬有所相同。功能分析说明，与肥胖症供体相比，来自较慢速方面体的Treg介导的CD4+波动T酶质诱发值得注意受损。平庸为对波动CD4+T酶质CD25和CD134理解的诱发减少。

上图1 深入的遗传基因式分析表明，CD4+Treg亚型式在慢速方面路由表当中减少。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有供体的活CD4+CD45RA -酶质上。根据标上物理解比对出10个元簇:思绪T酶质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T酶质;HLA-DR + GITR +思绪T酶质;两条路线程Treg_1;两条路线程Treg_2;两条路线程Treg_3;和两条路线程Treg_4。(a)适用9个相同Treg标上转换成的10个元簇的MST。每个节点象征性一个炮兵部队(100个炮兵部队)，大得多的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点两组周围上色。每个节点当中的甜品上图回应单个标上的理解级别。(b)每个元聚类的热上图，以表明整体标上理解。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转换成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对稀土元素为每个metacluster筒两条路线上图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP两组:两条路线程Treg_2 (e),两条路线程Treg_3 (f),两条路线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T酶质(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T酶质(l)。蓝色圆圈象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩反应器查。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 适用CITRUS的预测模型式推测，Treg振幅的减少是方面较慢速的标志。评定暂时性(a - f)和棉花分析(g-k)比较SP旁观者和冗余的HD旁观者在CD4+CD45RA−T酶质上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的象征性性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解完成分离，模拟FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)两组以及供体SP 606(蓝色)当中CD25+ cd127的振幅汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性兄集的筒两条路线上图;(c) HLA-DRloGITR−(两条路线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(两条路线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(两条路线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+两条路线程T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD路由表之间的相同。(j)筒两条路线上图表明了在SP(黑斑)和HD(灰点)两组当中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对稀土元素(数目)。(k)直方上图表明每个簇的遗传基因式(暗红色)和Treg标上相对理解与故事情节理解(白色);上列，两条路线程Treg_3;下面一行，两条路线程Treg_4。故事情节与所有其他簇当中标上的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩反应器查

上图3 与肥胖症献血者相比，方面较慢速者思绪treg的GITR减少。每个思绪CD4+T酶质元簇(思绪T酶质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T酶质;HLA-DR + GITR +思绪T酶质;两条路线程Treg_2;两条路线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个理解标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的理解热上图(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR理解串联，表明直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon匹配符号秩和反应器查，p< 0.07(蓝色)所有供体包括，p< 0.05(白色)供体SP 606和冗余的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR理解，从评定暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(蓝色)串联，表明直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符号秩反应器查

上图4 来自较慢速方面的CD4+ treg酶质控制波动CD4+T酶质的灵活性增高。SP两组用白色的两条路线和圆圈回应，HD两组用暗红色的两条路线和圆圈回应，蓝色的两条路线/圆圈回应供体sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T酶质完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标上为CFSE, Treg按通过观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠重置酶质，培植3当晚完成流式酶质术侦测。(a-d)与CD4+反之亦然者相对应的treg培植(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培植。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE诱发总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发总和。适用感染性解读(触发的鼓动酶质不含treg)计算诱发总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 波动CD4+T酶质对较慢速方面的T酶质重置的诱发格外尖锐。SP两组用白色的两条路线和圆圈回应，HD两组用暗红色的两条路线和圆圈回应，蓝色的两条路线/圆圈回应供体sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T酶质完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标上，treg按通过观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠重置酶质，培植3当晚完成流式酶质术(CD25反染)和酶质因兄分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者合作培植。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在研究成果生院当中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自较慢速方面兄的重置思绪CD4+Treg在GITR理解当中得到了扩展和丰富，务实了进一步研究成果Treg在1型式白血病不太可能会个体当中的关联性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28