Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病变进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现呼吸道自身免疫球蛋白到显现1型式白血病药理学患者的成效率在学童时期就有非常好的叙述，多个呼吸道自身免疫球蛋白阴性的学童当中亦有70%在血浆转换后10年底当中风白血病，而随访15年的学童这一比例减小到84%。相比较之下，分之一药理学1型式白血病一半以上的型式1型式白血病的发病机制还从未获取充分的研究成果。

愈发多的人开始采用分期系统来假设1型式白血病的成效：母形体在显现多种呼吸道自身免疫球蛋白时进入第1前期，显现血糖异常时进入第2前期，显现患者时进入第3前期。一些多发呼吸道自身免疫球蛋白阴性的母形体，在1期和2期，成效较慢速，并发展为发病的1型式白血病。我们早先叙述了一分组在首次检验到多种呼吸道自身免疫球蛋白结果显示后据估计10年无白血病的正因如此慢速成效者，这分组病变人数不算，但相似性非常明确。随后，我们发现呼吸道自身抗原免疫球蛋白CD8+T细胞内重排在成效减慢速的病变当中基本不长期存在，但在未来会发病和长年长期存在的白血病病变当中很不易检验到。这可能表明，与成效病变相比较，这些病变性疾病重排的调控增强。

早期研究成果表明，尽管调控性T细胞内(Treg)为数正常，但白血病病变长期存在一些功能性缺点，其当中包括对IL-2的重排能力增高。此外，白血病病变当中的effectCD4+T细胞内可能对调控非常具抵抗性，发挥为effectT细胞内的诱发增强，纯净导致的Treg和排泄导致的抑止Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内当中IL-2重排增强。本研究成果的用以是叙述了CD4+调控性T细胞内(Treg)在领头正因如此减慢速成效者当中的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁都有确诊的病变亲人当中检查1型式白血病的危险因素。我们早先叙述了长年减慢速成效者的相似性，他们保持多重呼吸道自身免疫球蛋白阴性最不算10年，但从未显现白血病的药理学患者，慢速性或非外阴性疾病。随后，10名继续保持无白血病并愿意备有大量血液循环结果显示的减慢速成效者划入T和B细胞内功能性研究。在迄今的研究成果当中，8名慢速成效者(SP分组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身免疫球蛋白阴性。所有的发起者都处于1型式白血病成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身免疫球蛋白对某些抗原的阴性重排，然而，一名病变已经处于2期据估计6年，但从未显现药理学患者，一名病变被病人为白血病，该患者72岁，在采集实验结果显示时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据研究当中对该NADP展开了原则上分析。受控外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多值流式细胞内术和T细胞内诱发试制分析NADP当中Treg的Hz、表观式和功能性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)展开无都由聚类研究，分析Treg表观式。

结果：与健康NADP相比较，来自慢速成效形体的心灵CD4+T细胞内的都由聚类说明了，激能活的心灵CD4+ TregHz减小，与抑制作用抑止的TNFR就其蛋白(GITR)传达减小有关。一名HbA1c上升的病变与成效减慢速者和归一化的对照分组相比较，Treg谱各不相同。功能性相比较较，与健康NADP相比较，来自减慢速成效形体的Treg依赖性的CD4+effectT细胞内诱发轻微受损。发挥为对effectCD4+T细胞内CD25和CD134传达的诱发减小。

示意图1 集中的表观式研究说明了，CD4+Treg亚型式在慢速成效函数调用当中减小。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有NADP的能活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上面物传达鉴定出10个元簇:心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)采用9个不同Treg上面转换成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个协同(100个协同)，非常大的元协同(10个元协同)在数据流分组周围上色。每个数据流当中的饼示意图对此单个上面的传达层次。(b)每个元聚类的热示意图，以说明了结构上上面传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转换成示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的沙质。(e-l)比起为数级为每个metacluster箱本站示意图(为数级> 0.05%)确定为HD和SP分组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞内(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞内(l)。蓝色带子代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对上面秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 采用CITRUS的预测模型式猜测，TregHz的减小是成效减慢速的标志。分级除此以外(a - f)和果树研究(g-k)比较SP发起者和归一化的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞内上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR传达展开受控，虚拟FlowSOM社群。(b) HD(黑斑)和SP(蓝点)分组以及NADPSP 606(蓝色)当中CD25+ cd127的Hz综合示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外次集合的箱本站示意图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达高强度着色，圆点突出的簇被识别为SP和HD函数调用之间的不同。(j)箱本站示意图说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组当中，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比起为数级(比例)。(k)数据集说明了每个簇的表观式(粉红色)和Treg上面比起传达与背景传达(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇当中上面的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对上面秩检验

示意图3 与健康献血者相比较，成效减慢速者心灵treg的GITR减小。每个心灵CD4+T细胞内元簇(心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个传达上面的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇当中所有HD(棕色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR传达组合成，说明了数据集(c)和综合示意图(d)。Wilcoxon配对上面秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有NADP包括，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和归一化的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR传达，从分级除此以外，从所有HD(棕色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)组合成，说明了数据集(e)和综合示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对上面秩检验

示意图4 来自减慢速成效的CD4+ treg细胞内支配effectCD4+T细胞内的能力增高。SP分组用蓝色的本站和带子对此，HD分组用紫色的本站和带子对此，蓝色的本站/带子对此NADPsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(需要的话者)被上面为CFSE, Treg按观察的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠能转化细胞内，指导3当晚展开流式细胞内术检验。(a-d)与CD4+需要的话者比起不应的treg指导(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE诱发百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百份。采用阴性对照(激能活的响不应细胞内不含treg)近似值诱发百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 effectCD4+T细胞内对减慢速成效的T细胞内能转化的诱发非常敏感。SP分组用蓝色的本站和带子对此，HD分组用紫色的本站和带子对此，蓝色的本站/带子对此NADPsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel上面，treg按观察的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠能转化细胞内，指导3当晚展开流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因次子研究。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同指导。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小当中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得出的正确性是，来自减慢速成效次子的能转化心灵CD4+Treg在GITR传达当中获取了扩展和丰富，凸显了促使研究成果Treg在1型式白血病风险母形体当中的举例来说的必要。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28